常见问题
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从慢病毒感染的细胞培养上清液中浓缩10-100倍,回收率高达60-70%。
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4h以上至过夜(10h以上)。
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1. 是否粘稠?导致粘稠的原因:核酸片段多,影响病毒吸附,最终导致病毒回收差;2. 处理前,荧光显微镜下观察GFP所占百分比,细胞状态好的话,GFP会在细胞内;3. 核酸酶处理后,样品保留5 uL-10 uL; 4.洗脱后的4 mL液体,测OD280的值,可以粗略的估算病毒的含量。
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是的,病毒上清最后收集在500 uL里面;根据下游实验安排交换缓冲液,可以用生理盐水或者任意需要的缓冲液。
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我们的RV mini Column不吸附质粒DNA。关于检测的3种方法,第一,PCR在变性步骤时,已整合到病毒基因组上的片段会因为加热病毒破裂释放出来;第二,逆转录病毒一般是RNA病毒,多具有逆转录酶,所以即使没有人为的反转录步骤,自行反转录;建议:第7步,最后一步,将样品加入至centrifugal filter,3000 rpm,4度离心10 min,剩余500 uL,加入PBS3.5 mL,3000rpm在4度离心10 min。可以用PBS洗涤2-3遍,病毒不会损耗,但有利于去除核酸片段。一般而言,病毒纯化之后不会去检测是否含有质粒,不知道客户下游实验做什么需要这个要求,目前国内外还没有这一特殊步骤来去除质粒的。...
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V1160柱子不会吸附乙肝病毒,但是要100%去除乙肝病毒特别是HBV的核酸,确实没有把握,可以用DNase去除核酸片段,不会去除病毒颗粒。